在日常細胞實(shí)驗中,我們經(jīng)常需要計算細胞濃度,以進(jìn)一步確定接種濃度或細胞數量。盡管自動(dòng)細胞計數儀提供了快速性,但對于某些細胞,尤其是那些處于復雜狀態(tài)的細胞,有研究表明其分析性能并不一致[1](對于細胞形態(tài)的識別,所采用的是不一樣的方法)。
在臨床實(shí)踐中,因血細胞自動(dòng)計數儀通常無(wú)法精準地識別細胞形態(tài),所以需使用經(jīng)典的血細胞計數板進(jìn)行儀器校準。利用顯微鏡手動(dòng)進(jìn)行細胞計數,這種方法已經(jīng)被廣泛認可[2]。
血細胞計數板規格及計數原理
血細胞計數板是一種經(jīng)典的細胞計數工具,具有上下兩個(gè)計數池。
在其上方覆蓋蓋玻片,形成深度為0.10mm的計數池。每個(gè)計數池分為9個(gè)大格,每個(gè)大格的規格為1.00mm×1.00mm。因視野所限,不易操作,容易造成較大誤差,所以一般采用定點(diǎn)(計數室4個(gè)角的大方格)取樣計數。(直徑較小的細胞如紅細胞,采用中間一個(gè)大方格內標準5個(gè)區域采集計數)
細胞濃度=(四個(gè)大方格的細胞數之和)/4×稀釋倍數×104個(gè)Cell/mL
博大博聚細胞計數儀的計數之道
博大博聚細胞計數儀,沿用經(jīng)典血細胞計數板的計數原理進(jìn)行研制(JJG 552-1988 血細胞計數板試行檢定規程),并可搭載一次性細胞計數片,其細胞計數片與標準血細胞計數板的計數池高度相同。
①在使用血細胞計數板計數時(shí),儀器相當于一個(gè)自帶電腦的自動(dòng)化顯微成像系統,屏幕能夠提供細胞高清圖像的實(shí)時(shí)預覽,精密的三軸聯(lián)動(dòng)控制系統,實(shí)現目標視野的精準走位,實(shí)時(shí)自動(dòng)調焦,保證圖片的清晰度,并通過(guò)算法自動(dòng)進(jìn)行識別與計數。
②在使用一次性細胞計數片時(shí),儀器屏幕會(huì )顯示虛擬刻線(xiàn),刻線(xiàn)對應的實(shí)際大小經(jīng)“仿細胞校準板(發(fā)明zhuanli號:ZL 2020 21855359.4)"嚴格標定,與血細胞計數板上的刻線(xiàn)面積(1*1mm2)一致。
③一次性細胞計數片的空腔高度設計嚴格標定為0.1mm,計數體積(0.1mm3)與血細胞計數板一致。
④在兩種耗材上,博大博聚細胞計數儀都采用標準的濃度計算公式,細胞濃度=(四個(gè)大方格的細胞數之和)/4×稀釋倍數×104個(gè)Cell/mL。
這使得博大博聚計數儀能夠實(shí)現計數結果人工核對。
注意:個(gè)別型號不做兼容血球計數板的設置,但是設計原理相同(具體信息請咨詢(xún)博大博聚科技有限公司)
博大博聚的細胞計數新范式
博大博聚細胞計數儀支持非染色(發(fā)明zhuanli號ZL 2013 1 0101403.0)、臺盼藍染色和熒光染色等多種計數模式。
儀器預設多種細胞樣本類(lèi)型,對于更復雜的細胞樣本,可通過(guò)自定義輔助判讀,以尋找適合不具代表性樣本的識別參數并可無(wú)限新增。
無(wú)論是秉持傳統方法還是融合創(chuàng )新思路,博大博聚計數儀都旨在為細胞計數和分析提供更全面的解決方案。
參考文獻
[[1]] .Borzova E. The Absolute Basophil Count. Methods Mol Biol. 2020;2163:109-124.
[[1]] Zhang M, Gu L, Zheng P, et al. Improvement of cell counting method for Neubauer counting chamber. J Clin Lab Anal. 2020;34:e23024.
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